本发明公开了一种适用于3D生物打印的水凝胶墨水的制备方法,具体按照以下步骤实施:首先,将壳聚糖衍生物溶于细胞培养基中,在冰水浴条件下冷冻,之后加入Pluronic F127衍生物,离心,冷藏,之后将天然多糖溶于去离子水中,加入高碘酸钠和乙二醇,在避光条件下搅拌,透析,冷冻干燥,冷藏后溶于细胞培养基中,最后将水凝胶前驱体浸入多糖交联剂培养基溶液中,稳定交联,即可。该方法利用壳聚糖或其衍生物与天然多糖交联剂反应,既提高了水凝胶墨水的结构稳定性,又实现了多糖分子的功能化修饰,丰富了该墨水的生物学用途。